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食品中羅丹明B(玫瑰紅)的現(xiàn)場快速檢測及實驗室檢測方法

更新更新時間:2013-04-18

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 1.定義 

羅丹明B是一種具有鮮桃紅色的人工合成的染料,英文名:Rhodamine B;分子式C28H31ClN2O3;分子量479.0175;結(jié)構(gòu)式為:
羅丹明B在溶液中有強烈的熒光, 用作實驗室中細胞熒光染色劑、有色玻璃等行業(yè)。不容許用作食品染色。
2.檢測原理 
羅丹明B具有脂溶性,被用作調(diào)味品(主要是辣椒粉和辣椒油)染色劑。使用了被污染的調(diào)味品制作食品時會造成殘留。調(diào)味品使用羅丹明B染色時含量較高,甚至直接摻入,可進行現(xiàn)場檢測。食品中因其含量較低,需送實驗室檢測。現(xiàn)場檢測中使用非極性有機溶劑(例正己烷、正己烷+丙酮等)將其溶解并提取出,提取液流過中性氧化鋁固相萃取小柱吸附羅丹明B,用非極性有機溶劑(例正己烷)淋洗小柱,洗脫樣品油脂和食品內(nèi)源性干擾物,用肉眼可觀測到在小柱上出現(xiàn)鮮亮的粉紅色條帶,判定為可疑樣品,該樣品需送實驗室作進一步確證檢驗。實驗室檢測法仍然采用非極性有機溶劑(例正己烷、正己烷+丙酮等)將羅丹明B 從食品中溶解并提取出,提取液流過中性氧化鋁固相萃取小柱吸附羅丹明B,用非極性有機溶劑(例正己烷)洗脫樣品油脂和食品內(nèi)源性干擾物,再用極性有機溶劑(例甲醇)將羅丹明B從小柱上洗脫并收集,用反相液相色譜儀-紫外/可見光檢測器進行定性定量檢測。
3.試劑和材料
3.1  層析用中性氧化鋁(100目),用前于105℃烘2小時,取下置干燥器中冷至室溫,裝入玻璃瓶中密閉放置。
3.2  正己烷(分析純);
丙酮(分析純);
甲醇(色譜純);
3.3                20%丙酮的正己烷液:取100ml丙酮加400ml正己烷混合,作為羅丹明B的提取液和凈化液。
3.4                氧化鋁固相萃取小柱:取5 ml塑料注射器管,下端口塞入小塊脫脂棉,裝入處理好的氧化鋁約3cm高,放置備用。
3.5        羅丹明B標準溶液:稱取羅丹明B (分析純試劑 沈陽試劑三廠)5.0mg,用20%丙酮的正己烷液(3.3)溶解并定容至50ml,配成含量為100ug/ml的標準儲備液。取此液0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0ml,用20%丙酮的正己烷液(3.3)稀釋并定容至50ml,配成濃度為 0.0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0ug/ml標準系列溶液。
3.6        玻璃器具
4.現(xiàn)場快速檢測方法
  4.1 辣椒粉 取辣椒粉一小勺(約5g)放入小燒杯中,加入約40ml含20%丙酮的正己烷(3.3),搖動或攪拌2分鐘,靜置。取5 ml塑料注射器套管,下端口塞入小塊脫脂棉,將事先處理好的氧化鋁(3.1項)倒入注射器管中約3cm高,做成氧化鋁固相萃取小柱,待樣品杯上方澄清后,慢慢倒入小柱中,下端接一廢液杯,視顏色深淺倒入2-5ml,注意不要倒入太多,保證小柱的中下部仍為白色, 此時,含羅丹明B的樣品在柱上部會出現(xiàn)鮮亮的粉紅色的熒光條帶,條帶邊緣清晰,粉紅色隨含量的增加而加深和加寬,不含羅丹明B的樣品提取液不會出現(xiàn)粉紅色條帶,只會出現(xiàn)黃紅色的界面不清晰的寬帶,然后用含20%丙酮的正己烷(3.3)20ml慢慢倒入小柱,粉紅色的條帶不下移,但更清晰,其余的黃紅色帶下移,可大部分被洗脫出,即可判斷為含羅丹明B的可疑樣品。
   4.2 辣椒油 取辣椒油一小勺(約2g)放入小燒杯中,加入約10ml正己烷(3.2),混勻。按4.1項中“取5 ml塑料注射器套管,……即可判斷為含羅丹明B的可疑樣品。”操作。
   4.3 判定 初步判斷為含羅丹明B的可疑樣品需送實驗室中進行液相色譜確證檢驗。 
5.實驗室檢測方法
5.1.儀器
液相色譜儀 (雙泵、紫外/可見光檢測器)
色譜柱   C18  4.6mm X 15cm(5μm) 
5.2提取和純化
5.2.1 辣椒粉:取辣椒粉1g,加入20ml含20%丙酮的正己烷(3.3),震搖10分鐘,靜置或過濾使分離出上層清液,殘渣加入10ml含20%丙酮的正己烷(3.3)重復(fù)提取一次,合并2次提取液,混勻,用滴管將上清液加入氧化鋁小柱(3.4)中[小柱預(yù)先用5ml提取液(3.3)潤濕],視顏色深淺決定上柱量,保證上完樣的小柱中下部仍為白色,含羅丹明B的樣品提取液在柱上部會出現(xiàn)鮮亮的粉紅色的熒光條帶,且粉紅條帶隨含量的增加而加深和加寬,不含羅丹明B的樣品提取液不會出現(xiàn)粉紅色條帶,只會出現(xiàn)黃紅色的不清晰的寬帶,用含20%丙酮的正己烷(3.3)洗小柱,粉紅色的條帶不下移,但更清晰,其余的黃紅色帶下移可大部分被洗脫出,可判斷為含羅丹明B的可疑樣品,待洗柱的流出液無色時,滴入5-10ml甲醇,將羅丹明B色帶洗下并收集,用甲醇定容后,注入液相色譜儀進行確認。 
5.2.2.辣椒油:稱取辣椒油1g,加入10ml含20%丙酮的正己烷(3.3),混合均勻后滴入氧化鋁小柱(3.4)中,按照5.2.1項中“用滴管將上清液加入氧化鋁小柱……注入液相色譜儀進行確認”進行操作。
5.2.3.其它食品:對于使用了紅辣椒油(粉)調(diào)味的食品(如紅油豆制品、紅油魚干等)稱取10-20g,用20%丙酮的正己烷(3.3)洗下紅油(粉),或?qū)悠放c洗脫液攪成勻漿將羅丹明B溶解提取出,將樣品液靜置或離心,分出有機相,根據(jù)水分的多少加入適量無水硫酸鈉脫水,按照5.2.1項中“用滴管將上清液加入氧化鋁小柱……注入液相色譜儀進行確認”進行操作。含量少的樣品因粉紅色條帶太窄和顏色較淡肉眼看不清楚,仍可采用上述辦法,進一步用20%丙酮的正己烷(3.3)洗滌小柱至流出液無色時,滴入5-10ml甲醇,將羅丹明B色帶洗下并收集,經(jīng)濃縮后,注入液相色譜儀進行確證檢驗。
5.3  液相色譜條件
5.3.1  色譜柱:C18 4.6mm X 15cm(5μm) 進樣 5ul
5.3.2 流動相:75%甲醇水溶液  1ml/min
5.3.3 檢測器: 紫外/可見光(UV/VIS)檢測器;波長:550nm
5.3.4  定性定量:羅丹明B標準溶液保留時間定性,外標法定量。
5.4  結(jié)果計算
    Y = C×V/M
Y——樣品中羅丹明B的含量(mg/kg)
C——從標準曲線上查得的羅丹明B的濃度(ug/ml)
V——測試樣品總定容體積(ml)
M——樣品的稱樣量(g)
5.5  注意事項:①使用C18柱的性能有差異,流動相濃度應(yīng)略作調(diào)整。②在本法所給分離條件下,樣品基質(zhì)在羅丹明B附近無干擾峰,其他許多紅色偶氮染料均可在羅丹明B之后出峰,注意調(diào)整這些干擾峰與羅丹明B分離度,干擾的成分為:蘇丹橙G、對位紅、蘇丹紅7B、蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ。(色譜儀器網(wǎng)

 

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