飼料中的三聚氰胺檢測方法
更新更新時間：2013-04-18
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要：本文采用液相色譜儀對飼料中的三聚氰胺進行檢測，建立了飼料中三聚氰胺的液相色譜法，zui小檢測濃度達0.01mg/kg，回收率＞80%，峰面積的RSD為0.275% ，有良好的線性關(guān)系（r=1.00000），具有快速、準確、等特點。
三聚氰胺，簡稱三胺，分子式C3N6H6，是一種重要的氮雜環(huán)有機化工原料。由于三聚氰胺分子中含有大量氮元素，而普通的全氮測定法測飼料和食品中的蛋白質(zhì)含量時不能排除這類偽蛋白氮的干擾，因而一些廠商為了能降低成本而添加這種化工原料，以提高產(chǎn)品中蛋白質(zhì)含量。《化學(xué)品安全手冊》第三卷和化學(xué)品安全卡片說明：長期或反復(fù)大量攝入三聚氰胺可能對腎與膀胱產(chǎn)生影響，導(dǎo)致產(chǎn)生結(jié)石。奶粉中相繼查出含大量的三聚氰胺，不由讓我們對飼料中是否含有三聚氰胺，產(chǎn)生質(zhì)疑。本文采用浙江福立分析儀器有限公司生產(chǎn)的FL2200液相色譜儀建立飼料中三聚氰胺快速、準確的檢測方法。
1、 材料和方法
1.1 主要儀器和試劑
液相色譜儀；
高速離心機（10000r/min）；
超聲波震蕩儀；
渦旋混合器；
分析天平（萬分之一）；
溶劑過濾器（帶0.45um有機、水系過濾膜和真空泵）；
乙腈（HPLC級）；
三聚氰胺（≥99.0%）；
檸檬酸（分析純）；
辛烷磺酸鈉（色譜級）；
三錄乙酸（優(yōu)級純）；
乙酸鉛（優(yōu)級純）；
水（二次蒸餾水以上）；
稀釋液:50%甲醇水溶液；
1.2 色譜條件：
色譜柱 Venusil ASB C8 4.6*250mm 5um
流動相 乙腈：10mM/L檸檬酸+10mM/L辛烷磺酸鈉緩沖液=10：90（pH=3.0）
檢測波長 240nm
柱溫 40℃
流速 1ml/min
進樣量 20uL
2、實驗部分
2.1三聚氰胺標準儲備液和標準溶液的配制
準確稱取三聚氰胺標樣100.0mg ，放于25ml燒杯中，加稀釋液20ml超聲波溶解1分鐘，然后轉(zhuǎn)移到100ml的容量瓶中，用稀釋液清洗燒杯5次，每次10ml，然后把清洗后的稀釋液全部轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中，用稀釋液定容100ml，即得濃度為1000mg/L三聚氰胺標樣溶液。
準確量取濃度為1000mg/L三聚氰胺標樣溶液50ml，用流動相定容至500ml，即得濃度為100mg/L的三聚氰胺標準溶液。
分別準確量取濃度為100mg/L的三聚氰胺標準溶液0.8ml、2ml、20ml、40ml、80ml、放于100ml的容量瓶中，用流動相定容100ml，得濃度為0.8mg/L、2mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L的標準溶液，過0.45um的有機過濾頭過濾，保存待測。
2.1.1 重復(fù)性測定
取濃度為80.0mg/L的標準溶液，重復(fù)進樣3次，測定結(jié)果見表1，色譜圖見圖1。
2.1.2 線性試驗
取濃度為0.8mg/L、2mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L、50mg/L的標準品分別作樣，繪制濃度-峰面積的曲線。實驗表明：三聚氰胺在0.8-80.0mg/L間，有良好的線性，見圖2。
可得：W=-0.037868+0.000011*A；R2=1.00000
2.1.3 三聚氰胺zui小檢測濃度
在上述試驗條件下，以3S/N為zui小檢測濃度，三聚氰胺的zui小檢測濃度為0.01mg/kg
2.2空白實驗
稱取5.00g純凈水于100ml錐形瓶中，加入50ml三錄乙酸溶液（1%）和2ml乙酸鉛溶液（22g/L），搖勻，超聲提取20min。靜置2min，取上層清液30ml，10000r/min離心10min。取上清液10ml做待凈化液。
（以下流速控制＜1.00ml/min）
搭好固相萃取裝置，接上混合型陽離子交換固相萃取柱，向小柱中加入3ml甲醇，抽至近干，加入3ml水活化，抽至近干，將凈化液緩慢轉(zhuǎn)移至固相萃取柱，抽至近干，加3ml水洗滌，抽至近干，加3ml甲醇洗滌，抽至近干，換成收集管，加入6ml氨化甲醇溶液洗脫，把收集的收集液于55℃下氮氣吹干，殘留物加2ml流動相溶解，渦旋混合2min，超聲波2min，0.45um過濾頭過濾。
在上述色譜條件下進樣，結(jié)果未出峰。
2.3 樣品前處理與測定
隨機抽取市面上的飼料，進行處理分析。
稱取5.00g試樣于100ml錐形瓶中，加入50ml三錄乙酸溶液（1%）和2ml乙酸鉛溶液（22g/L），搖勻，超聲提取20min。靜置2min，取上層清液30ml，10000r/min離心10min。取上清液10ml做待凈化液。
（以下流速控制＜1.00ml/min）
搭好固相萃取裝置，接上混合型陽離子交換固相萃取柱，向小柱中加入3ml甲醇，抽至近干，加入3ml水活化，抽至近干，將凈化液緩慢轉(zhuǎn)移至固相萃取柱，抽至近干，加3ml水洗滌，抽至近干，加3ml甲醇洗滌，抽至近干，換成收集管，加入6ml氨化甲醇溶液洗脫，把收集的收集液于55℃下氮氣吹干，殘留物加2ml流動相溶解，渦旋混合2min，超聲波2min，0.45um過濾頭過濾。
2.4 回收率實驗
稱取5.00g試樣于100ml錐形瓶中，分別加入濃度為2mg/L三聚氰胺標準溶液1ml、2ml、3ml；分別加入濃度為20mg/L三聚氰胺標準溶液1ml、2ml、3ml；分別加入濃度為40mg/L三聚氰胺標準溶液1ml、2ml、3ml，然后依次加入49、48、47ml三錄乙酸溶液（1%）和2ml乙酸鉛溶液（22g/L），搖勻，超聲提取20min。靜置2min，取上層清液30ml，10000r/min離心10min。取上清液10ml做待凈化液。
（以下流速控制＜1.00ml/min）
搭好固相萃取裝置，接上混合型陽離子交換固相萃取柱，向小柱中加入3ml甲醇，抽至近干，加入3ml水活化，抽至近干，將凈化液緩慢轉(zhuǎn)移至固相萃取柱，抽至近干，加3ml水洗滌，抽至近干，加3ml甲醇洗滌，抽至近干，換成收集管，加入6ml氨化甲醇溶液洗脫，把收集的收集液于55℃下氮氣吹干，殘留物加2ml流動相溶解，渦旋混合2min，超聲波2min，0.45um過濾頭過濾。
3、 結(jié)論
試驗證明：采用液相色譜儀測定飼料中的三聚氰胺，具有檢測靈敏度高、精密度高、準確度高、線性范圍好和回收率高等優(yōu)點，*符合分析要求，適合各類飼料中三聚氰胺的快速檢。（色譜儀器網(wǎng)）
